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本制品是采用Probe探针杂交法进行Real-Time PCR的专用试剂。已经将DNA聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液等试剂预混成一种适合Real-Time PCR反应检测用预混试剂，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。

本制品采用HotMaster Taq DNA聚合酶可以有效抑制非特异的PCR扩增，大大提高扩增效率，进行高灵敏度的Real-Time PCR反应。HotMaster Taq DNA聚合酶利用抑制剂通过温度调节方式封闭DNA聚合酶的底物结合位点，温度低于40℃时，形成非活性的酶-抑制剂复合物，当温度升高至引物特异性的退火温度时，结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动，因此最大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生，大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。

• 本制品不含参比染料ROX，客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。
  
• 本制品含有4mM MgCl₂（反应体系终浓度是2mM Mg²⁺），可用25mM MgCl₂优化Mg²⁺浓度。

• 以50μL反应体系为例，反应液配制请在冰上进行。
  

  成分	用量	终浓度
  2×Probe PCR Mix	25μL	1×
  DNA模板	2μL	as required
  Forward Primer (10μM)	1μL	0.1～0.8μM
  Reverse Primer (10μM)	1μL	0.1～0.8μM
  Probe	2μL	50～300 nM
  ddH2O	至50μL	-

• PCR扩增程序：
  

  温度	时间	循环数
  94℃	2～3min	1
  94℃	10～20sec	35～45
  55～65℃	10～20sec
  72℃	20～60sec
  72℃	5～10min	1